PCR પ્રયોગોમાં સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાતા કેટલાક ઉત્સેચકો

પોલિમરેઝ સાંકળ પ્રતિક્રિયા, સંક્ષિપ્ત તરીકેપીસીઆરઅંગ્રેજીમાં, એક મોલેક્યુલર બાયોલોજી તકનીક છે જેનો ઉપયોગ ચોક્કસ ડીએનએ ટુકડાઓને વિસ્તૃત કરવા માટે થાય છે.તેને શરીરની બહાર ખાસ ડીએનએ પ્રતિકૃતિ તરીકે ગણી શકાય, જે ખૂબ જ ઓછી માત્રામાં ડીએનએ વધારી શકે છે.સમગ્ર દરમિયાનપીસીઆરપ્રતિક્રિયા પ્રક્રિયા, પદાર્થોનો એક વર્ગ મહત્વપૂર્ણ ભૂમિકા ભજવે છે - ઉત્સેચકો.

1. તાક ડીએનએ

ના શરૂઆતના દિવસોમાં પ્રયોગોમાંપીસીઆર, વૈજ્ઞાનિકોએ Escherichia coli DNA પોલિમરેઝ I નો ઉપયોગ કર્યો, પરંતુ આ એન્ઝાઇમમાં એક સમસ્યા છે: દર વખતે ચક્ર કરવામાં આવે ત્યારે તેને નવા એન્ઝાઇમને ફરીથી ભરવાની જરૂર છે, જે ઓપરેશનના પગલાંને સહેજ જટિલ બનાવે છે અને તે સંપૂર્ણપણે આપમેળે વિસ્તૃત થવું મુશ્કેલ છે.1988માં વિજ્ઞાનીઓએ થર્મસ એક્વાટિકસમાંથી આકસ્મિક રીતે Taq DNA પોલિમરેઝને અલગ કર્યા પછી આ સમસ્યાનું નિરાકરણ આવ્યું. ત્યારથી, DNAનું સ્વચાલિત એમ્પ્લીફિકેશન એક વાસ્તવિકતા બની ગયું છે.આ એન્ઝાઇમની શોધ પણ કરે છેપીસીઆરટેકનોલોજી એક અનુકૂળ, વ્યવહારુ અને સાર્વત્રિક ટેકનોલોજી.હાલમાં, ડીએનએ કીટમાં તાક ડીએનએ પોલિમરેઝ સૌથી સામાન્ય પોલિમરેઝ છે.

2. PfuDNA

ઉપર સૂચવ્યા મુજબ, Taq DNase માં એક મોટી ભૂલ છે, તેથી વિજ્ઞાનીઓએ અસંગતતાના કારણે બિન-વિશિષ્ટ એમ્પ્લીફિકેશન ટાળવા માટે અમુક હદ સુધી Taq DNA પોલિમરેઝમાં ફેરફાર કર્યો છે, જેના પરિણામે અચોક્કસ પરીક્ષણ પરિણામો આવે છે.પરંતુ Taq DNA પોલિમરેઝમાં ફેરફાર ઓરડાના તાપમાને DNA પોલિમરેઝની પ્રવૃત્તિને અટકાવી શકે છે.PfuDNA પોલિમરેઝ Taq DNA પોલિમરેઝના ઉપરોક્ત ગેરફાયદાને સારી રીતે બનાવી શકે છે, જેથી PCR પ્રતિક્રિયા સામાન્ય રીતે થઈ શકે, અને લક્ષ્ય જનીન એમ્પ્લીફિકેશનની સફળતા દરને અસરકારક રીતે સુધારી શકાય.

3. રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેસ

રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેજ 1970 માં શોધાયું હતું. આ એન્ઝાઇમ નમૂના તરીકે RNA, સબસ્ટ્રેટ તરીકે dNTP નો ઉપયોગ કરે છે, બેઝ પેરિંગના સિદ્ધાંતને અનુસરે છે, અને 5′-3′ દિશામાં RNA નમૂનાના પૂરક DNA સિંગલ સ્ટ્રૅન્ડનું સંશ્લેષણ કરે છે.રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેસ મુખ્યત્વે DNA અથવા RNA ટેમ્પ્લેટ્સમાંથી DNA પોલિમરેઝ પ્રવૃત્તિ પર આધારિત છે અને તેથી તેની કોઈ 3′-5′ exonuclease પ્રવૃત્તિ નથી.જો કે, તેમાં RNase H પ્રવૃત્તિ છે, જે રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેજની સંશ્લેષણ લંબાઈને અમુક હદ સુધી મર્યાદિત કરે છે.વાઇલ્ડ રિવર્સ ટ્રાન્સક્રિપ્ટેઝની ઓછી વફાદારી અને થર્મોસ્ટેબિલિટીને કારણે, વૈજ્ઞાનિકોએ તેમાં ફેરફાર પણ કર્યો.

માટેપીસીઆરપ્રયોગો, મુખ્ય ઉપભોજ્ય વસ્તુઓ છે: વ્યક્તિગત પીસીઆર ટ્યુબ, 4/8-સ્ટ્રીપ પીસીઆર ટ્યુબ, પીસીઆર પ્લેટ્સ.

લેબિયોનીપીસીઆર ઉપભોક્તાનીચેના છેફાયદા:

પીસીઆર પ્લેટો: વ્યાપક થર્મલ સાયકલ સુસંગતતા;ઉચ્ચ-કોન્ટ્રાસ્ટ, સરળ સારી ઓળખ;સારી રીતે ફ્લોરોસેન્સ પ્રતિબિંબ; સારુંહીટ ટ્રાન્સફર;પ્રમાણિત DNase, RNase, DNA, PCR અવરોધકો અને પરીક્ષણ કરેલ પાયરોજન-મુક્ત.

વ્યક્તિગત પીસીઆર ટ્યુબ: બાષ્પીભવન-પ્રતિરોધક; સારુંહીટ ટ્રાન્સફર;ઉત્તમ ઓપ્ટિકલ સ્પષ્ટતા;પ્રમાણિત DNase, RNase, DNA, PCR અવરોધકો, અને પરીક્ષણ કરેલ પાયરોજન-મુક્ત.

4/8-સ્ટ્રીપ્સ પીસીઆર ટ્યુબ: અલ્ટ્રા-પાતળી દિવાલો;ઉચ્ચ સ્પષ્ટતા;સારી ફ્લોરોસેન્સ પ્રતિબિંબ;ફાર્માસ્યુટિકલ ઉદ્યોગ, ખાદ્ય ઉદ્યોગ અને મોલેક્યુલર બાયોલોજીમાં ઉપયોગ કરી શકે છે; ઉચ્ચ-ગુણવત્તાવાળી, વર્જિન PP સામગ્રી; પ્રમાણિત DNase, RNase, DNA, PCR અવરોધકો અને પરીક્ષણ કરાયેલ પાયરોજન-મુક્ત.