સમાચાર - અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબનો ઉપયોગ અને સાવચેતીઓ

અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબનો ઉપયોગ અને સાવચેતીઓ

1) યોગ્ય અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન ટ્યુબ પસંદ કરો.નોંધ કરો કે યુએફ પટલ વિવિધ રસાયણો પ્રત્યે તેમની સહિષ્ણુતાના સ્તરમાં ભિન્ન છે.સામાન્ય રીતે, 10 kDa મોલેક્યુલર વેઇટ કટ-ઓફ સાથે અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન ટ્યુબને મોલેક્યુલર વેઇટ કટ-ઓફ સાથે પસંદ કરી શકાય છે જે 35 kDa જેવા રસના પ્રોટીનના મોલેક્યુલર વજનના 1/3 કરતા વધારે ન હોવી જોઈએ.જો રસના પ્રોટીનનું પરમાણુ વજન લગભગ 10 kd હોય, તો 3 KD ના પરમાણુ વજન કટ-ઓફ સાથે અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન ટ્યુબનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.

(2) અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન, તાજી ખરીદેલ, શુષ્ક છે, જેમાં ઉપયોગ કરતા પહેલા અતિ શુદ્ધ પાણી ઉમેરવામાં આવે છે અને પાણી સંપૂર્ણપણે પટલમાંથી પસાર થાય છે, બરફ સ્નાન અથવા રેફ્રિજરેટર થોડી મિનિટો માટે પહેલાથી ઠંડુ થાય છે.પછી પાણી રેડવામાં આવે છે, એટલે કે પ્રોટીન પ્રવાહી, અને તેમાં કેટલું ઉમેરવામાં આવે છે, જે નળીની ટોચ પર સફેદ રેખા કરતાં વધુ ન હોય.ઓપરેશન હલકું છે, અને પ્રોટીન સોલ્યુશન ઉમેરતા પહેલા અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન ટ્યુબને બરફ પર ઠંડુ કરવાની જરૂર છે.

3) ગુરુત્વાકર્ષણના સમૂહ અને કેન્દ્ર બંને સંતુલન સુધી પહોંચવાના હતા.નોંધ કરો કે રોટેશનલ સ્પીડ અને પ્રવેગક ખૂબ ઝડપી નથી, અન્યથા અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન મેમ્બ્રેનને સીધું નુકસાન કરે છે.સેન્ટ્રીફ્યુગલ અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન શરૂ કરવામાં આવ્યું હતું (સેન્ટ્રીફ્યુજને 4 ડિગ્રી પહેલા ઠંડુ કરવામાં આવ્યું હતું).વિવિધ સેન્ટ્રીફ્યુજના RPM ને g માં રૂપાંતરિત કર્યા પછી, તે અલગ હતું.સેન્ટ્રીફ્યુજના પ્રવેગને ન્યૂનતમમાં સમાયોજિત કરવામાં આવ્યો હતો, જે પટલ પર દબાણ ઘટાડે છે.નોંધ, સેન્ટ્રીફ્યુજ તેની ગંતવ્ય ગતિએ પહોંચી ગયા પછી સેન્ટ્રીફ્યુજને છોડવાની ખાતરી કરો, અથવા જો તમને કોઈ સમસ્યા હોય, તો તમે તેને પ્રથમ વખત હેન્ડલ કરી શકતા નથી.સ્પિન્ડલ માટે પટલનું ઓરિએન્ટેશન સૂચનો અનુસાર એડજસ્ટ કરવામાં આવ્યું હતું (કોણીય સેન્ટ્રીફ્યુજ કેસ મેમ્બ્રેનથી અક્ષ લંબ છે).વ્યવહારુ ઉપયોગમાં, સામાન્ય પરિભ્રમણ ગતિ સૂચનોમાં દર્શાવેલ કરતાં ઓછી છે, જેથી સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબનું જીવન લંબાવી શકાય.

3) ગુરુત્વાકર્ષણના સમૂહ અને કેન્દ્ર બંને સંતુલન સુધી પહોંચવાના હતા.નોંધ કરો કે રોટેશનલ સ્પીડ અને પ્રવેગક ખૂબ ઝડપી નથી, અન્યથા અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન મેમ્બ્રેનને સીધું નુકસાન કરે છે.સેન્ટ્રીફ્યુગલ અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન શરૂ કરવામાં આવ્યું હતું (સેન્ટ્રીફ્યુજને 4 ડિગ્રી પહેલા ઠંડુ કરવામાં આવ્યું હતું).વિવિધ સેન્ટ્રીફ્યુજના RPM ને g માં રૂપાંતરિત કર્યા પછી, તે અલગ હતું.સેન્ટ્રીફ્યુજના પ્રવેગકને ન્યૂનતમમાં સમાયોજિત કરવામાં આવ્યો હતો, જે પટલ પર દબાણ ઘટાડે છે.નોંધ, સેન્ટ્રીફ્યુજ તેની ગંતવ્યની ઝડપે પહોંચી ગયા પછી સેન્ટ્રીફ્યુજ છોડવાની ખાતરી કરો, અથવા જો તમને કોઈ સમસ્યા હોય, તો તમે તેને પ્રથમ વખત હેન્ડલ કરી શકતા નથી.સ્પિન્ડલ માટે પટલનું ઓરિએન્ટેશન સૂચનો અનુસાર એડજસ્ટ કરવામાં આવ્યું હતું (કોણીય સેન્ટ્રીફ્યુજ કેસ મેમ્બ્રેનથી અક્ષ લંબ છે).વ્યવહારુ ઉપયોગમાં, સામાન્ય પરિભ્રમણ ગતિ સૂચનોમાં દર્શાવેલ કરતાં ઓછી છે, જેથી સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબનું જીવન લંબાવી શકાય.

(4) જ્યારે બાકીના 1ml પર કેન્દ્રિત કરવામાં આવે, ત્યારે 50ul બફર સોલ્યુશન લો, 10ul ફ્લો ઉમેરો અને જુઓ કે ત્યાં કોઈ વાદળી રંગ છે કે કેમ, અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન ટ્યુબમાં પ્રોટીન ખૂટે છે કે કેમ.જો ટ્યુબ લીકી હોય, તો ઉપલા સ્તરને ફરીથી રેડો અને અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન શરૂ કરવા માટે નવી ટ્યુબમાં પ્રવાહ કરો.ટ્યુબ ચૂકી ગઈ હતી કે કેમ તે ચોક્કસપણે નક્કી કરવા માટે, ફ્લોથ્રુ પહેલા 5mgml BSA સાથે 10 મિનિટ માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ કરો, પ્રોટીન ગ્લુ અથવા બ્રેડફોર્ડ ક્રૂડ એસે પર ચાલતા રહો અને બાકીના કેન્દ્રિત પ્રોટીન સોલ્યુશન (જે બરફ પર ચાલે છે અને પ્રોટીનને ગરમ થતા અટકાવે છે) ઉમેરીને ચાલુ રાખો. તમામ સાંદ્રતા ઉમેરવામાં આવી છે.સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દરમિયાન કાળજી લો જો પ્રોટીનનો વરસાદ થાય છે, જે ટ્યુબ બંધ થવા તરફ દોરી જાય છે.જો વરસાદ થાય છે, તો નક્કી કરો કે વરસાદનું ચોક્કસ કારણ પ્રોટીનની અતિશય સાંદ્રતા અથવા અયોગ્ય બફર છે;એકસાથે બહુવિધ અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન ટ્યુબના અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન દ્વારા, એકાગ્રતામાં ઘટાડો કરીને, અને બાદમાં પ્રોટીનનો વરસાદ ન થાય ત્યાં સુધી વિવિધ બફર સોલ્યુશન્સની આપલે દ્વારા ઉકેલી શકાય છે.

(5) પ્રોટીનને કેન્દ્રિત કરવા માટે પ્રથમ થોડા પગલાઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે, અને જો બફર બદલવાનું હોય, તો ધીમેધીમે નવા બફર (0.22um અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન મેમ્બ્રેન દ્વારા અલ્ટ્રાફિલ્ટરેશન) કુલ પ્રોટીનના લગભગ 1ml ઉમેરો અને ત્રણ માટે લગભગ 1ml પર ફરીથી કેન્દ્રિત કરો. સળંગ વખત, ઇચ્છિત પ્રોટીન સાંદ્રતાના આધારે અંતિમ કેન્દ્રિત અંતિમ વોલ્યુમ સાથે, સામાન્ય રીતે 500ul કરતાં વધુ નહીં, પણ 200ul ની અંદર પણ.દરેક વખતે ઓછામાં ઓછા 10 × અથવા તેથી વધુ વોલ્યુમ સંવર્ધન દ્વારા ગણવામાં આવે તેટલું બફર ફેરફાર, ત્રણ પ્રસંગોએ 1000 × અથવા વધુ પ્રાપ્ત કરો.

પોસ્ટ સમય: નવેમ્બર-09-2022